Центр ЭКО
Вспомогательные репродуктивные технологии

8 (3812) 331 400
8 (3812) 331 809
ул. Старозагородная роща, д. 8

Зарождение и жизнь эмбриона до имплантации

Зарождение жизни – таинство, которое пытаются постичь не один год и даже не один век. С появлением метода экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) человеку удалось коснуться «божественного» и приоткрыть эту тайну. О том как «создают жизнь» в условиях лаборатории ЭКО, рассказывает эмбриолог Центра ЭКО «Евромед» Додонов Павел Николаевич.

Процесс возникновения новой жизни начинается с получения клеток, необходимых для оплодотворения. У женщины после стимуляции суперовуляции проводится пункция фолликулов. Далее в эмбриологической лаборатории в фолликулярной жидкости под микроскопом эмбриолог находит яйцеклетки (ооциты), проводит ориентировочную оценку зрелости клеток и переносит их в специальную питательную среду для последующего оплодотворения.

Сперма супруга (партнера) обрабатывается специальными растворами для селекции лучших сперматозоидов и удаления ненужных клеток (эпителий, лейкоциты и т.п.).

Через 2-3 часа после адаптации яйцеклеток к условиям питательной среды можно проводить оплодотворение. Существует несколько способов оплодотворения клеток in vitro (вне организма). «Классический» - ЭКО, когда предварительно обработанные сперматозоиды в определённой концентрации добавляются в питательную среду с яйцеклетками и оплодотворение происходит так же, как в организме. Сперматозоид проникает через оболочку ооцита и оплодотворяет его.

При сниженных показателях качества спермы (снижение концентрации, подвижности, морфологии сперматозоидов), когда невозможно создать концентрацию сперматозоидов, достаточную для оплодотворения методом ЭКО, применяется метод ИКСИ (ICSI) (интроцитоплазматическая инъекция сперматозоида в яйцеклетку).

Другим показанием к ИКСИ является тяжелое аутоиммунное бесплодие у мужчин при титре антиспермальных антител  в сперме более 50% (наличие антител, фиксированных на сперматозоидах, выявляется исследованием MAR-тест, которое выявляет иммуноглобулины классов A и G, вызывающие склеивание мужских половых клеток и их обездвиживание).

ИКСИ применяется также при отсутствии оплодотворения или при недостаточном оплодотворении в предыдущих попытках (оплодотворено менее 50%), а также при малом количестве яйцеклеток. Суть метода состоит в том, что под микроскопом проводится отбор живых морфологически нормальных сперматозоидов, их иммобилизация, далее один сперматозоид отбирается в микроиглу и вводится непосредственно в цитоплазму яйцеклетки. Таким образом, можно гарантировать попадание одного лучшего сперматозоида в ооцит.

Модификацией классического ИКСИ является процедура ИМСИ (IMSI). Это усложнённый вариант, при котором отбор сперматозоидов проводится  с помощью оптики с высокой разрешающей способностью (увеличение в 6 300 раз). Для сравнения, при обычном ИКСИ увеличение составляет 400 раз. Метод отбора сперматозоидов ИМСИ занимает гораздо больше времени, чем традиционная процедура ИКСИ, однако позволяет существенно повысить эффективность ЭКО в случаях тяжелого мужского фактора бесплодия.

Параллельно с процедурой ИКСИ можно выполнить процедуру ПИКСИ (PICSI). В физиологическом процессе созревания сперматозоида на его головке происходит формирование рецепторов к гиалуроновой кислоте, которая является основным компонентом ооцит-кумулюсного комплекса (это яйцеклетка с окружающими её клетками фолликулярного эпителия).

Критерием отбора сперматозоидов методом ПИКСИ является прилипание зрелых спермиев к гиалуроновой кислоте, которая нанесена на дно культуральной чашки, таким образом можно выбрать морфологически нормальные и одновременно функционально зрелые сперматозоиды и далее провести оплодотворение методом ИКСИ. У сперматозоидов, способных вступать в контакт с гиалуронаном, установлен более низкий показатель хромосомных аномалий и лучшая интеграция ДНК. Показаниями к проведению ПИКСИ являются низкий процент оплодотворения, плохое качество эмбрионов в предыдущих попытках после ИКСИ, а также низкое содержание зрелых сперматозоидов в эякуляте (менее 80%) (выявляется с помощью HBA-теста, путем подсчета процентного соотношения прилипших к гиалуроновой кислоте (зрелых) и несвязанных с ней (незрелых) сперматозоидов).

После проведения оплодотворения тем или иным способом,  клетки помещают в инкубатор при температуре 37°С.

Через 16-18 часов формируются мужской и женский пронуклеусы, генетический материал которых еще не слился.

Образование пронуклеусов говорит о том, что сперматозоид  попал в яйцеклетку, произошло оплодотворение и начинает формироваться зигота - клетка, несущая хромосомы от двух родителей.

На этом этапе можно оценить количество пронуклеусов и их качество.

Следующий этап развития эмбриона оценивается на 2 сутки, к этому моменту должно пройти деление клетки и должен сформироваться 2-4-х клеточный эмбрион.

На этой стадии можно оценить размеры клеток (бластомеров) и наличие фрагментации (участков цитоплазмы, не включённых в состав клеток). Общепринятая классификация дробящихся эмбрионов по качеству: A-B-C-D (A - самый лучший, D - самый худший). Равные бластомеры и отсутствие фрагментации говорят о хорошем потенциале и отличном качестве эмбриона. 

На 3 сутки развития проходит ещё несколько клеточных делений и формируется 6-8 бластомеров, которые также оцениваются по размеру и степени выраженности фрагментации, если она имеется.

На 4 сутки эмбрион состоит из 10-16 бластомеров, межклеточные контакты начинают уплотняться (процесс компактизации), формируется морула (лат. morula - тутовая ягода).          

К концу 4 суток внутри морулы начинает образовываться полость (процесс кавитации), начинается накопление жидкости и с того момента, как объём полости достигает 50%, эмбрион называется бластоцистой.

Клетки бластоцисты дифференцируются на 2 слоя - наружный слой трофобласт, из которого будут формироваться все внезародышевые оболочки плода, и внутриклеточная масса, из которой будут формироваться  все ткани будущего ребёнка. Многоклеточный трофобласт и хорошо развитая внутриклеточная масса позволяют судить о  высоком потенциале эмбриона к имплантации.

   

В процессе развития бластоцисты  оболочка  начинает растягиваться, истончаться и разрывается. Далее начинается процесс хэтчинга (вылупления) эмбриона из оболочки. Только вышедшая из оболочки бластоциста способна имплантироваться (прикрепиться) к стенке матки. 

 

В случае утолщения или уплотнения оболочки эмбриона бластоциста не сможет самостоятельно разорвать её. В таких случаях проводится вспомогательный хэтчинг (процесс истончения оболочки).

Начиная со 2 и вплоть до 6 суток развития можно проводить перенос эмбрионов в полость матки.